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本试剂盒可测各种动物红细胞、全血等样本中丙酮酸激酶活性。

丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）在ADP存在下可催化PEP产生丙酮酸，丙酮酸再由LDH将其转变为乳酸，同时将NADH变为NAD。

丙酮酸激酶（PK），是红细胞葡萄糖无氧酵解途径中三个限速酶之一，直接关系着红细胞能量代谢，此酶缺乏属常染色体隐性遗传，可能导致非球形红细胞溶血性贫血。

• 试剂二每支用时加双蒸水1.4mL，用不完-20℃以下保存3～7天。
  
  • 如果你的样本量少，可以将1.4mL再分成2～3管放-20℃以下保存，每次取一管用，以免反复冻融。
• 试剂四用时每支加双蒸水320μL，用不完-20℃以下保存。
  
• 试剂五用时每支加双蒸水650μL，用不完-20℃以下保存。

可调340nm波长的紫外分光光度计及0.5cm光径石英比色皿，涡旋混匀器，37℃水浴锅，秒表，蒸馏水，生理盐水，血红蛋白测定试剂。

• 50％红细胞悬液的制备：取肝素抗凝全血，放冰箱4～8℃自然沉淀，吸弃血浆、白细胞、血小板部分，用冷的生理盐水洗涤红细胞1～3次，1000转/分钟离心5分钟，洗完后再用冷的生理盐水制成50%红细胞悬液(红细胞︰生理盐水＝1︰1)。
  
  • 当天若来不及检测，最好以全血形式4℃～8℃可保存4～5天。如果你的样本很多，也可以直接吸取离心后沉淀的红细胞制备成1︰19的溶血液。
• 1︰19溶血液的制备：取50%的红细胞悬液20μL加试剂六稳定剂180μL，即1︰9稀释后备用。
  
• 血红蛋白测定：取1︰19溶血液用氰化高铁血红蛋白测试试剂进行血红蛋白Hb的测定，具体见Hb测定说明书。

• 按下表加入各成分配制反应体系：
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  试剂一	1mL	1mL
  试剂二	50	50
  试剂三	50	50
  试剂四	25	25
  试剂五	50	50
  混匀后，37℃预温10分钟
  双蒸水		20
  样本	20

  • 因试剂太贵，一般情况下对照管不需要做（对照管很稳定，除非实验精确性要求很高），所以只需做测定管15分钟前后的吸光度OD值之差。
• 加样本的同时开始计时，快速混匀后，波长340nm，0.5cm光径的石英比色皿，双蒸水调零，测定30秒时初始吸光度A1值，然后将比色皿中的反应液倒入预先编号的原试管中，放入37℃水浴箱中准确水浴15分钟，然后取出试管测定15分30秒时的吸光度A2值。

• 单位定义：在37℃，pH7.6的条件下，每克Hb每分钟将1μmol的PEP转变成丙酮酸为一个酶活力单位。
  
• 计算公式：
  

  丙酮酸激酶 活力(U/gHb)	＝	ΔA	×	V反总	÷CHb
  		6.22×T×d		V样

  
  
• 6.22：PEP毫摩尔消光系数；
  T：反应时间，15分钟；
  d：比色光径，0.5cm；
  V_反总：反应液总体积，1.195mL；
  V_样：取样量，0.02mL；
  C_Hb：溶血液血红蛋白浓度，gHb/mL。